CreとLoxPの受精卵への同時導入を可能にするベクター

Cre-LoxPマウスは、Creマウスと特定配列をLoxP配列で挟んだベクターを導入したFloxマウスを交配させて作製する。例えば2色の蛍光たんぱく質（GFP, ｍCherry）による組織特異的なレポーターマウスを作製する場合には、①組織特異的プロモーターに連結したCre配列②ユビキタスプロモーターに連結したFlox化GFP③mCherryを連結させたベクタープラスミドを導入すれば、理論的には交配の過程を経ることなく組織特異的にmCherryを発現するレポーターマウスを得ることができる。

発明者らはこの理論に従って、CreとFloxを含有しているプラスミドを大腸菌で作製しようと試みたところ、LoxP配列で挟まれた遺伝子の特定配列が消失することが判明した。これは宿主の違う組織特異的プロモーターであっても大腸菌内でCreが発現しLoxP配列を介した自発的な組換えが生じていることが示唆された（右図）。

そこで発明者らは、大腸菌内でのプロモーター発現を抑制する20塩基程度の配列を同定し、Cre上流の組織特異的プロモーターに連結させたところ、自発的な組換えを抑制し充分量のプラスミドベクターを得ることに成功した（上図）。得られたプラスミドを導入したF0世代のマウスおよびイモリにおいて、Cre-LoxPシステムが働き組織特異的な蛍光たんぱく質の発現を確認した。

同定した配列は大腸菌内でのプロモーターを抑制する配列であり、Cre-LoxPの共存ベクターだけでなく、菌体に悪影響を与えるリスクのあるタンパク質をコードするベクターの構築にも有用である。